人CTGF定量EIA試劑盒使用說明

更新時(shí)間：2009-12-23 | 點(diǎn)擊率：4102

人CTGF定量EIA試劑盒使用說明

原理

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-EIASA法。用抗人CTGF單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CTGF與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人CTGF，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入酶底物TMB，出現(xiàn)藍(lán)色，加終止液硫酸，顏色變黃，在450nm處測OD值，CTGF濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的CTGF濃度。

試劑盒組成

1． 96孔微孔板：一塊，已包被抗人CTGF單抗。

2．樣品稀釋液：一瓶

3． *抗體工作液：一瓶

4．酶標(biāo)抗體工作液：一瓶

5．底物稀釋液：兩瓶

6．終止液：一瓶

7．洗滌液（20X）：一瓶

8．標(biāo)準(zhǔn)品（凍干粉，2000ng/ml ）：一管

9．坐標(biāo)紙：一張

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1．洗滌液：用重蒸水1：20稀釋。

2．收集血液標(biāo)本：采集血清或培養(yǎng)液盡早檢測，2-8℃保存一天；需更長時(shí)間須冷凍（-20℃）保存，避免反復(fù)凍融。

3．標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前每管中加入100ul蒸餾水溶解后即可。

4．底物工作液配制：使用前將OPD片放入底物稀釋液中溶解，每片加液5ml。

檢測程序

1．建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8孔，每孔中各加入樣品稀釋液100ul，*孔加標(biāo)準(zhǔn)品100ul，混勻后用加樣器吸出100ul，移至第二孔。如此反復(fù)作倍比稀釋至第七孔，后，從第七孔中吸出100ul棄去，使之體積均為100ul。第八孔為空白對照。

2．加樣：待測品孔每孔各加入待測樣品100ul。

3．將反應(yīng)板充分混勻后置37℃ 120分鐘。

4．洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4－6次，向?yàn)V紙上印干。

5．除空白孔外，每孔中加入*抗體工作液50ul。

6．將反應(yīng)板置37℃ 60分鐘。

7．洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4－6次，向?yàn)V紙上印干。

8．除空白孔外，每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。

9．將反應(yīng)板置37℃ 60分鐘。

10．洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4－6次，向?yàn)V紙上印干

11．每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)5－15分鐘（視顏色深淺靈活掌握）。

12．每孔加入50ul終止液混勻。

13．在450nm處測吸光值。