PCR擴(kuò)增試劑盒使用后可擴(kuò)增出多條DNA片段

　　PCR擴(kuò)增試劑盒是從克隆有ThermuaquaticusDNAPolymerase基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后，再經(jīng)三次過柱純化分離出來的一個(gè)約94KD的重組蛋白。無外源核酸酶和細(xì)菌DNA污染，穩(wěn)定性好，特異性強(qiáng)，適用于各種PCR擴(kuò)增。本試劑盒已經(jīng)包括了PCR擴(kuò)增使用的各種試劑，便于客戶配套使用。使用本制品擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物的3'端附有一個(gè)A堿基，因此可直接克隆于T-Vector中。

　　所謂多重PCR（MultiplexPolymeraseChainReaction，mPCR），也稱復(fù)合PCR，由Chambehian'在1988年提出（Chambehian'et.al.NucleicAcidsRes.1988Dec9;16(23):11141–11156.），基本原理與常規(guī)PCR相同，區(qū)別在于多重PCR的反應(yīng)體系是加入多對(duì)引物，各對(duì)引物分別結(jié)合在模板的相應(yīng)位置，擴(kuò)增出多條DNA片段。

　　PCR擴(kuò)增試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

　　1.進(jìn)行PCR反應(yīng)前，可以將所有g(shù)DNA的濃度稀釋到同一濃度，并轉(zhuǎn)移到PCR8聯(lián)管中，一方面是便于排槍操作，另一方面是加入相同起始量的gDNA，這樣可以降低文庫的濃度差異，便于混合文庫。

　　2.大多數(shù)情況下引物是1管，操作相當(dāng)方便；當(dāng)目標(biāo)區(qū)域是外顯子或者是其他連續(xù)區(qū)域時(shí)，我們會(huì)把引物分裝為2管，分別命名PrimerpoolT1與PrimerpoolT2，這時(shí)需要第二輪PCR前把產(chǎn)物合并，再進(jìn)行下一步反應(yīng)。

　　3.執(zhí)行多重PCR反應(yīng)時(shí)，特別是樣本量多的情況下，可以將T1設(shè)為一組，T2設(shè)為一組，便于制備反應(yīng)試劑混合液和排槍操作；并把解凍好的試劑放置在冰盒上，在冰盒上進(jìn)行加樣操作。

　　4.在實(shí)驗(yàn)中，可以在PCR管壁上和管蓋上同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)編號(hào)標(biāo)記，防止高溫或其他原因?qū)е掠浱?hào)消失，避免后續(xù)產(chǎn)物混合操作失誤，造成樣本交叉污染。

　　5.第二輪PCR后，因?yàn)閅FBufferB試劑比較粘稠，在清洗純化的時(shí)候不能吸走所有試劑，可以剩余5-10μl，否則會(huì)把磁珠一起吸走，造成樣品的損失，導(dǎo)致產(chǎn)物回收率下降。